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1、做细胞爬片(爬片的步骤就不详述了),注意:洗片子的PBS和固定用的4%多聚甲醛一定要新鲜配制的(一周以内的都能用), 因为PBS和4%多聚甲醛放久了后,都会有自发荧光。

2、抗体的孵育:预实验的时候荧光根据文献和经验设定一、二抗的浓度,一抗4度孵育过夜(时间8~12h);二抗(荧光抗体)孵育时要避光,孵育好后用PBS充分冲洗;可以将做好的片子直接在板子中孵育,如果从节约的角度来看,可以用12或24孔板比较好。

3、做好以上步骤后,将板子里放点PBS,保存片子湿润,不要干片,这样会影响细胞形态。

4、到激光共聚焦观察室后,再将爬片取出,在干净的载玻片上滴一滴50%的甘油,然后将爬片取出来倒扣在滴过甘油的载玻片上(即细胞在2层玻片之间,一定不要反了哦;还有千万不要用中性树胶封片!

5、显微镜下观察即可。

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