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一、关于如何计算IC50
1、改良寇式法:lgIC50=Xm-I(P-(3-Pm-Pn)/4)
Xm:lg 最大剂量
I:lg(最大剂量/相临剂量)
P:阳性反应率之和
Pm:最大阳性反应率
Pn:最小阳性反应率
举个例子:各组浓度0.1、0.01、0.001、0.0001、0.00001、0.000001,稀释倍数为10,最大浓度为0.1,抑制率为0.95、 0.80、0.65、0.43、0.21,0.06。代入计算公式:
Pm=0.95
Pn=0.06
P=0.95+0.80+0.65+0.43+0.21+0.06=3.1
Xm=lg0.1=-1
lgI=lg0.1/0.01=1
lgIC50=-1-1*(3.1-(3-0.95-0.06)/4)=-3.6025
IC50=0.00025
2、Bliss法:自己查阅书籍
3、IC50计算软件
4、自己用EXCEL做趋势线来求IC50,关于LD50的方法与此相似!
5、在线求IC50或EC50:http://chiryo.phar.nagoya-cu.ac.jp/javastat/JavaStat-j.htm
二、结果统计学处理
所有数值以x±s表示,应用SPSS软件进行方差分析,p<0.05时为相差显著,p<0.01时为相差非常显著。可以以时间为横轴,光吸收值为纵轴绘制细胞生线,专门公式求IC50。或计算抑制率。细胞死亡率%=OD对照组-OD实验组/OD对照组excel表中可以做两两比较的T-test,这个你可以参考一下;你的数据应该用多个样本均数的T-test,方差分析也可。用的软件是SPSS或者SAS。
三、孔板的重复利用
培养板要用好的(最好进口板),不好的板或重复利用的板只可做预实验。一般贴壁生长的细胞用重复利用的培养板效果不是很好,因为培养板表层在生产时涂有一层促进细胞贴壁的物质,在清洗后多半会失去。悬浮或是半悬浮生长的细胞还可以。建议不要用太多次,即使是进口的板子使用次数也不要超过3次,底值最好在测得值的1/3一下。
强烈建议培养板不要重复使用:1、泡酸是可以,但是泡完酸的板子很不利于细胞的生长,会出现帖壁不好,细胞生长缓慢等情况.2、这样的板子消毒灭菌很不彻底,如果有万一,则因小失大.3、重复用的板子洗不干净在培养过程中易出现杂质.
重复利用时
做法1:
洗净后用2%NaoH浸泡4小时,再用1%稀盐酸浸泡4小时,冲洗15遍,蒸馏水冲洗3遍,烘干,UV照射过夜(紫外2小时以上消毒即可)
做法2:
泡酸2-4小时,老师让我们别超过4小时,(普通的玻璃仪器是过夜)。捞出,冲洗干净,烘干后,UV 照射过夜。估计跟其他收集在一起,钴60照射消毒.
做法3:
1.做完MTT后用大水流尽量将板冲净,然后用洗衣粉水泡几个小时(小心最好让洗衣粉先化开)。
2.用自来水冲净洗衣粉水,倒扣晾干。
3.重铬酸钾加浓硫酸配成的酸液中浸泡过夜泡洗液(六小时以上即可)后自来水洗净(20次左右)每个孔都要处理。
4.用去离子水冲洗3遍,双蒸水冲洗3遍,烤干5.超净台中紫外线照射2个小时左右,就可以用了,不可以高压。
做法4:
1、测完值的96孔板甩掉孔内培养液,放入超声中超10-30分钟,晾干(或烘干)备用。此步骤可最大程度的洗去污垢及细胞。
2、每孔加入50-100ul的胰酶(0.05%),我一般加60ul,加完胰酶后水平振荡96孔板以使胰酶均匀覆盖于细胞表面,室温下放置至细胞被消化脱落为止。假如你想消化快一点的话可将96孔板放到37度培养箱内(胰酶在37度时的活力最大)。对于顽固贴附在壁上的细胞,此步骤最为有效。
3、甩掉胰酶,自来水下冲洗,晾干(或烘干)备用。如果不烘干就泡酸,那么96孔板残留的水分将稀释酸液,长期以往泡酸的效果下降。
4、将晾干的96孔板泡酸(中强酸)过夜,捞起后自来水下冲洗10遍;双蒸水冲洗3遍。三蒸水冲洗3遍。烘干备用。泡酸时特别注意时间不要太长了,否则板子变黄,影响最后的OD值的测定。
5、做实验前,96孔板至少在紫外灯下照射30分钟,但不能长期照射。紫外线长期照射可使板变黄,我的两块板放在超静台上忘了拿出来,一直照了两个星期,等我从超静台上取出板已经变成黄色。
注  意:
1、在实验中若你测得某一个孔的数值偏高,虽然有很多因素会导致数值偏高,但是如果是板底的污点引起的话你可以消除。拿出96孔板擦一擦值偏大孔的板底部,再测值。你会发现孔高的值又会到正常水平。因为咱们做实验时手不可避免的接触96孔板板底留下痕迹,这些痕迹就会使吸光度升高。
2、96孔板洗的次数多了,板底自然留下划痕,这就会导致读数的不均而影响实验结果。你不妨在做实验前测一次96孔板的值(此值为初值),实验测得的为后值。后值减去初值就接近实验的真实值。

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